Klinická biologie

cholesterol + O₂ ₄-cholestenon + H₂O₂
2 H₂O₂ + chromogen červeně zbarvený produkt + 4H₂O

(Chromogen= 4-aminoantipyrin + fenol)

Referenční rozmezí:

celkový cholesterol v séru: +,3,8 – 5,2 mmol/l
HDL cholesterol: muži: 0,9-1,4mmol/l, ženy: 1,2-1,7 mmol/l
LDL cholesterol: do 3,4 mmol/l

KLB význam:

 koncentrace cholesterolu v séru (hypercholesterolemie):

- kardiovaskulární onemocnění

- diabetes mellitus

- nefrotický syndrom

- těhotenství

- hypofunkce štítné žlázy aj.

- hepatopatie

- pankreopatie

- revmatická horečka

 koncentrace cholesterolu v séru (hypocholesterolemie):

- těžký stupeň hepatopatie (cirhóza jater, těžké hepatitidy, toxické poškození jater)

- hladovění (podvýživa)

- hyperthyreóza

- dlouhodobá léčba kortikoidy aj.

- těžké septické stavy

- urémie v terminálním stádiu

Triacylglyceroly

Princip:

triacylglyceroly glycerol + 3 mastné kyseliny
glycerol + ATP glycerol-3-fosfát + ADP
glycerol-3-fosfát + O₂ H₂O₂ + dihydroxyacetonfosfát
2 H₂O₂ + 4-aminoantipyrin (chromogen) barevný produkt + 4H₂O

Referenční rozmezí: 0,9 – 1,7 mmol/l

KLB význam:

↑koncentrace TG v séru (hypertriacylglycerolemie):

- geneticky podmíněné poruchy metabolismu lipoproteinů

- diabetes mellitus (neléčený nebo špatně léčený)

- chronická renální onemocnění (nefrotický syndrom)

- alkoholismus

- dna

- hyperthyreóza

- jaterní onemocnění (cholestáza)

- pankreatitida atd.

↓ koncentrace TG v séru (hypotriacylglycerolemie):

- po některých lécích (Ascorutin, Clofibrat, hormonální kontraceptiva aj.)

- dědičné poruchy metabolismu lipoproteinů

Apolipoproteiny

Princip:

Stanovení apolipoproteinů na analyzátoru Turbox

Jedná se o imunoprecipitační test s nefelometrickou detekcí hodnoty „end-point“. Antisérum proti příslušnému apolipoproteinu se naředí v pufru a přidá se k alikvóttu pacientova séra. Po inkubaci se měří rozptyl světla způsobený komplexy antigen-protilátka. Výsledný rozptyl světla je přímo úměrný koncentraci stanovovaného apolipoproteinu.

Referenční rozmezí:

apo A1:

muži: 1,09-1,84 g/l

ženy: 1,06-2,28 g/l

riziková hodnota < 0,9 g/l

apo B:

muži: 0,63-1,88 g/l

ženy: 0,56-1,82 g/l

ALP

Princip:

ALP štěpí v N-methyl-D-glukaminovém pufru 4-nitrofenylfosfát na 4-nitrofenol a fosfát. ALP je aktivována chloridem sodným. Mírou aktivity je množství uvolněného 4-nitrofenolu, který se stanovuje fotometricky buď kinetickým postupem, nebo metodou konstantního času po zastavení enzymové reakce inhibitorem ALP, který blokuje aktivní centrum enzymu.

Referenční rozmezí:

muži:  2,3 kat/l

ženy:  2,1 kat/l

děti:  4,00 kat/l

KLB význam:

 katalytická koncentrace ALP v séru:

- uzávěr žlučových cest, poškození jater (např. alkoholem), jaterní tumory aj.

- kostní procesy (nádory kostí, rachitis aj.)

- těhotenství

- nefropatie, hyperparathyreóza

- podávání léků(anabolika,antibiotika,morfium…)

- některé leukémie

- infekční mononukleosa

ACP

Princip metody:

ACP hydrolyzuje 1-naftylfosfát na 1-naftol a fosforečnan. 1-naftol pak reaguje s Fast Red TR za vzniku žlutého azobarviva. Prostatickou frakci ACP lze zablokovat inhibicí vínanem a stanovit katalytickou koncentraci neprostatické ACP. Katalytická koncentrace prostatické ACP se pak vypočítá jako rozdíl mezi katalytickou koncentrací celkové a neprostatické ACP.

Referenční rozmezí:

celková ACP:

dospělí:  170 nkat/l

děti:  300 nkat/l

prostatický izoE:  24 nkat/l

KLB význam:

 katalytická koncentrace ACP:

- karcinom prostaty (hlavně s metastázemi do kostí)

- kostní onemocnění

- karcinom prsu

- nedostatečnost ledvin

- hemolytická anémie

- fyziologicky u dětí

- primární hyperparatryreodismus

AST

Princip metody:

L-aspartát + 2-oxoglutarát oxalacetát + L-glutamát

oxalacetát + NADH + H⁺ L-malát + NAD⁺

Sledujeme úbytek absorbance NADH. Katalytická koncentrace AST je úměrná poklesu absorbance při 340, 334 nebo 365 nm.

Referenční rozmezí:  0,67 kat/l

KLB význam:

 katalytická koncentrace AST v séru:

- jaterní onemocnění(akutní virová hepatitida-stoupá už týden před oktetem,vrchol 7.-12.den od začátku klinických projevů-AST 10x-100x,ALT 20x-100x),infekční mononukleosa,toxické poškození jater

- akutní infarkt myokardu

(vzestup za 4 – 6 hodin, maxima dosahuje po 16 – 48 hod, pokles za 3 – 7 dní)

- cévní mozkové příhody

- u otrav, po podání morfinu

- šok

- po srdeční masáži, u zhmožděnin svalstva

 katalytická koncentrace AST v séru:

- při nedostatku vitaminu B₆

(derivát vitaminu B₆ – pyridoxalfosfát – je koenzymem aminotransferas)

ALT

Princip:

L-alanin + 2-oxoglutarát pyruvát + L-glutamát

pyruvát + NADH + H⁺ L-laktát + NAD⁺

Sledujeme úbytek absorbance NADH. Katalytická koncentrace ALT je úměrná poklesu absorbance při 340, 334 nebo 365 nm.

Referenční rozmezí:

 0,67 kat/l

KLB význam:

 katalytická koncentrace ALT v séru:

- jaterní onemocnění (př. Infekční mononukleóza, karcinom jater)

- akutní virová hepatitida (v 99,5 % případů nastává zvýšení aktivity již na konci inkubační doby, a to 20x až 100x))

- akutní infarkt myokardu

(vzestup aktivity ALT není tak vysoký jako u AST a neodráží poškození srdečního svalu; je obrazem městnání krve v játrech při selhávání srdce)

- plicní embolie (v 50 % případů)

- krátkodobý vzestup i po požití většího množství alkoholu

 katalytická koncentrace ALT v séru:

- při nedostatku vitaminu B₆

(derivát vitaminu B₆ – pyridoxalfosfát – je koenzymem aminotransferas)

α-AMS

Princip :

Substrátem pro stanovení katalytické koncentrace je p-nitrofenol (G1)-a, D-maltoheptaosid (EPS). Po hydrolýze vnitřní části řetězce a-amylázou a zbytku řetězce glukosidázou se postupně uvolní žlutě zbarvený p-nitrofenol (pNF), jehož absorbance se měří při 405nm. Přírůstek koncentrace za jednotku času je úměrný katalytické koncentraci a-amylázy ve vzorku.

Referenční rozmezí:

v séru do 1,5 kat/l

v moči do 7,5 kat/l

KLB význam:

 aktivity AMS v séru:

- choroby pankreatu, např. akutní pankreatitida (zvýšení za 3 – 12 hod, maximum za 20 – 30 hod, normalizace do 4 dnů), nádory pankreatu aj.

- po operacích nebo úrazech pankreatu

- perforovaný žaludeční nebo duodenální vřed

- žlučová kolika

- onemocnění slinných žláz (zánět příušní žlázy – tzv. parotitida, nádor, trauma)

- akutní alkoholizmus (asi u 10 % případů)

- diabetická ketoacidóza

- někdy u chorob jater

- renální nedostatečnost

- makroamylasemie (-amylasa se váže na imunoglobulin za vzniku makromolekulového komplexu, který není schopen procházet do moči; v moči nacházíme dormální nebo snížené hodnoty -AMS)

Molekula -amylasy je relativně malá, proto prochází z krevního oběhu přes glomerulární filtr i do moči.

 aktivity AMS v moči:

- choroby pankreatu, např. akutní pankreatitida (zvýšení asi za 6 – 10 hod po zvýšení v séru, přetrvává déle než v séru), nádor pankreatu aj.

- po operacích nebo úrazech pankreatu

- perforovaný žaludeční nebo duodenální vřed

- žlučová kolika

- onemocnění slinných žláz (zánět příušní žlázy – tzv. parotitida, nádor, trauma)

- akutní alkoholizmus (asi u 10 % případů)

- diabetická ketoacidóza

 aktivity AMS v moči:

- renální nedostatečnost

- makroamylasemie

GMT

Princip:

gama glutamyl transferasa přenáší z gama L-(+)-glutamyl-4-nitroanilidu glutamylový zbytek na dipeptidový akceptor, ktarým je glycylglycin, jenž současně slouží i jako pufr.

Uvolněný 4-nitroanilin se stanovuje fotometricky po zastavení enzymatické reakce okyselením.

L-γ-glutamyl-3-karboxy-4-nitroanilid + glycylglycin ↔ L-γ-glutamyl-glycylglycin +

5-amino-2-nitrobenzoát

Referenční hodnoty:

muži:0,25-1,77 μkat/l

ženy: 0,17-1,1 μkat/l

KLB význam:

↑ aktivita v séru:

Onemocnění jater (př.virová hepatitida-význam v rekonvalescenci, kdy slouží jako vodítko pro hodnocení průběhu, chronická alkoholová toxická hepatitida-GMT je citlivým ukazatelem poškození jaterního parenchymu alkoholem, steatóza jater)
Obstrukce žlučových cest (cholestáza)- GMT se také označuje jako ,,cholestázu ukazující enzym“
Nádorová onemocnění jater
Zánět pankreatu, karcinom pankreatu, aj.

Princip metody:

kreatinfosfát + ADP kreatin + ATP

D-glukosa + ATP D-glukosa-6-fosfát + ADP

D-glukosa-6-fosfát + NADP⁺ glukonát-6-fosfát + NADPH + H⁺

Referenční rozmezí:

muži:  3,2 kat/l

ženy:  2,4 kat/l

(souvisí s množstvím svalové hmoty)

KLB význam:

 katalytická koncentrace CK v séru:

- infarkt myokardu

- (zvýšení po 2 – 4 hod, maximum za 24 – 36 hod, pokles k normě asi za 2 – 3 dny)

- po kardiochirurgických operacích

- onemocnění kosterního svalstva (progresivní svalová dystrofie, rabdomyolýza – nekróza příčně pruhovaného svalstva)

- poškození kosterního svalstva (např. úrazy, po i.m. injekcích)

- zvýšená svalová námaha (více u netrénovaných osob)

- po porodu

- hypothyreóza

Princip:

Laktátdehydrogenasa katalyzuje reakci:

pyruvát + NADH + H⁺ L-laktát + NAD⁺

Mírou katalytické koncentrace enzymu je rychlost úbytku NADH.

Referenční rozmezí: do 6 kat/l

KLB význam:

 aktivity LD v séru:

- onemocnění myokardu

- infarkt myokardu

(Zvýšení nastává po 8 – 12 hod, maximum 2. až 3. den, k poklesu dochází pomalu. Proto je stanovení LD vhodné pro diagnostiku infarktu myokardu i po 1 týdnu, kdy aktivita CK a AST je už normální.)

- akutní srdeční selhání

- krevní choroby (leukemie, hemolytická anémie, perniciózní anémie)

- onemocnění jater (akutní hepatitida, intoxikace organickými rozpouštědly, metastázy do jater, cholestáza, infekční mononukleóza, jaterní kóma)

- embolie plic

- akutní selhání ledvin

- šok (vzrůst všech izoenzymů)

- fyziologicky v graviditě (zvýšení až po porodu, zdrojem jsou degenerující buňky placenty)

- vysoká aktivita LD ve výpotku (např. pohrudničním) budí podezření z nádorového původu

- jaterní cirhóza, obstrukční ikterus

CHS

Princip metody:

Cholinesterasa štěpí substrát butyrylthiocholinjodid na kyselinu máselnou a thiocholinjodid, který reaguje s kyselinou dithio-bis-nitrobenzoovou za vzniku žlutého zbarvení (5-thio-2-nitrobenzoátový anion). Katalytická koncentrace se určuje z přírůstku absorbance inkubační směsi při 405 nm.

Referenční rozmezí: 76 - 230 kat/l

KLB význam:

 katalytické koncentrace CHE v séru:

- otrava organofosfáty (nekompetitivní inhibitory CHE)

- onemocnění jater (CHE slouží jako ukazatel jaterní proteosyntézy)

- jaterní cirhóza

- chronická hepatitida

- jaterní tumory aj.

- infarkt myokardu

- proteinová malnutrice (podvýživa)

- ale i těžké poruchy proteosyntézy při těžké hepatopatii

 katalytické koncentrace CHE v séru:

- u nefrotického syndromu

- u alkoholismu

- ve fázi uzdravování po hepatitidě

- diabetes mellitus

- psoriáza

Zvýšení katalytické koncentrace je méně obvyklé a nemá diagnostický význam.

Glukosa

Princip

Glukóza se oxiduje kyslíkem za katalytického působení glukózooxidásy na peroxid vodíku a glukonát. Vzniklý peroxid vodíku se stanovuje oxidační kopulací se substituovaným fenolem a 4-aminoantipyrinem katalyzovanou enzymem peroxidasou.

Referenční rozmezí

v séru: 3,8 – 6,1 mmol/l

v celé krvi: 3,3 – 5,6 mmol/l

1) KLB význam

↑ koncentrace (hyperglykémie):

diabetes mellitus
nádory předního laloku hypofýzy, hyperfunkce štítné žlázy a jiné endokrinní choroby
onemocnění pankreatu (akutní pankreatitida, karcinom)
onemocnění CNS (encefalitida, edém mozku, meningitida, tumory)
při těžším infarktu myokardu (v 50%)
stresy, traumata, infekce
někdy v těhotenství
při poškození jater – cirhóza, nádory (většinou jako porušená glukózová tolerance, kdy při nadbytku glukózy vázne její přeměna na glykogen, tzn. že při požití glukózy nalačno je zvýšená koncentrace glukózy v krvi, nalačno bez požití glukózy je naopak koncentrace glukózy v krvi snížená (játra nemají dostatečnou zásobu glykogenu)
po lécích (salicyláty, kontraceptiva, kortikosteroidy, thiazidová diuretika)

Diabetické kóma je charakteristické hyperglykémií a ketózou. Obě vzrůstají už před ostatními příznaky, klinické projevy jsou podobné jako u hypoglykemického šoku.

↓ koncentrace (hypoglykémie):

fyziologické stavy: těhotenství, laktace, velká fyzická námaha, těžká podvýživa
po nadměrném požívání kofeinu, nikotinu a alkoholu (ethanol inhibuje glukoneogenezi)
některá onemocnění GIT
hepatitida, toxická poškození jater (vyčerpání jaterního glykogenu)
vliv léků (inzulín, perorální antidiabetika, salicyláty)
vrozené poruchy metabolismu sacharidů (intolerance fruktosy, galaktosemie aj.)

Hlavním nebezpečím hypoglykémie je nedostatečné energetické zásobení mozku (neuroglykopenie) s příznaky jako je slabost, třes, pocit hladu, bolesti hlavy, nauzea, usínání, mentální zmatenost, ztráta orientace a kontaktu s okolím, halucinace, nakonec křeče, ztráta vědomí a smrt.

Dalším nebezpečím je hypoglykemický šok, pro který je typický prudký pokles glykémie (pozvolný pokles je často snášen bez obtíží do koncentrace cca 1,1 mmol/l).

Bilirubin

Princip

Bilirubin kopuluje s diazotovanou kyselinou sulfanilovou ve slabě kyselém prostředí za vzniku intenzivě zbarveného roztoku azobarviva vhodného k fotometrickému stanovení. Celkový bilirubin (přímý a nepřímý) se stanovuje po přidání roztoku akcelerátoru, přímý bilirubin se stanovuje bez akcelerátoru.

Referenční rozmezí

celkový v séru: do 17 μmol/l

přímý v séru: do 4,3 μmol/l

1) KLB význam hyperbilirubinemie

O hyperbilirubinemii mluvíme při zvýšení bilirubinu nad 20 μmol/l. Při hodnotě bilirubinu 34 μmol/l se zpravidla projeví žloutenka – žluté bělmo, sliznice měkkého patra a kůže.

při poškození hepatocytů viry (virová hepatitida) a toxiny (alkohol, léčiva, jedy)
při obstrukčním ikteru (nejčastěji žlučový kámen, méně často nádor)

Pozn.

Při intrahepatálním (virová hepatitida) a posthepatálním ikteru (uzávěr žlučových cest) je podíl přímého bilirubinu větší než 50 %

Při nadprodukci bilirubinu – při hemolytických procesech, kdy je zvýšený rozpad hemoglobinu a kapacita jater nestačí transportovat zvýšenou nabídku bilirubinu do žluče.

Příčiny: hemolytická anémie (vrozené i získané), nedostatek vitaminů (perniciózní anémie)

Pozn.

Při prehepatálním ikteru (hemolytická anémie apod.) je podíl nepřímého bilirubinu často vyšší než 80 % celkového bilirubinu.

Urea

Princip

Močovina je hydrolyticky štěpena za katalytického působení ureázy na NH₃ a CO₂. NH₃ reaguje s α-ketoglutarátem za vzniku glutamátu. Reakci katalyzuje GMD. Současně dochází k oxidaci koenzymu NADH na NAD⁺, což se projeví poklesem absorbance při 340 nm. Tento pokles je úměrný koncentraci močoviny.

urea + 2 H₂O 2 NH + CO

2 α-ketoglutarát + 2 NH + 2 NADH 2 L-glutamát + 2 H₂O + 2 NAD⁺

Referenční rozmezí

v séru: 2,5 – 8,3 mmol/l (do 15 let jsou hodnoty nižší)

v moči: 320 – 570 mmol/d

Význam močoviny

Močovina je konečným katabolitem dusíkového metabolismu bílkovin (resp. amoniaku vzniklého z AMK, jejich NH₂ skupin). Tvoří se převážně v játrech (močovinový cyklus). Močovina tvoří asi 85% veškerého dusíku moče.

Kreatinin

Princip

Kreatin reaguje v alkalickém prostředí s kyselinou pikrovou za vzniku oranžově červeného zbarvení, které se měří fotometricky.

V séru se stanovuje kreatinin po deproteinaci, v moči po zředění.

Referenční rozmezí

v séru: muži: 60 – 120 μmol/l

ženy: 50 – 110 μmol/l

KLB význam

↑ koncentrace v séru (hyperkreatininemie):

při akutním selhání ledvin a chronické insufucuenc (nedostatečnosti) ledvin
při náhlém rozpadu svalstva (např. rozsáhlá zranění, spáleniny a svalová dystrofie)
vrcholová svalová námaha
pokročilý diabetes mellitus
prerenální příčiny (déle trvající poruchy prokrvení ledvin – šok, srdeční selhání)